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會議分享 | 禽白血病的檢測技術(shù)現(xiàn)狀

2023-06-30 1500人閱讀 來源:

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2023年6月12-14日,第七屆中國動物健康與食品安全大會在成都圓滿舉辦。北京明日達科技發(fā)展有限責任公司作為聯(lián)盟理事單位成員禽白血病精準凈化方案參會,并在“肉雞健康養(yǎng)殖與食品安全”平行論壇作《禽白血病的檢測現(xiàn)狀》報告。

報告筆記(主講人:孟藏龍)


禽白血病是一類由禽白血病病毒引起的家禽多種腫瘤性疾病的總稱。它除了會導致腫瘤致死外,還會引起很多亞臨床癥狀,比如說產(chǎn)蛋性能、生產(chǎn)性能下降,在免疫禽病疫苗時出現(xiàn)免疫抑制的情況。

根據(jù)禽白血病經(jīng)典亞群分型方法共可以分為11個亞群,在自然狀態(tài)下可感染雞主要是ALV-A、B、C、D、E、J、K七個亞群,其中ALV-E屬于雞內(nèi)源性的禽白血病毒。禽白血病毒是非常重要的垂直傳播性疾病,它的傳播放大效應是非常驚人的,一只感染的祖代雞在不檢測淘汰的情況下,會生產(chǎn)24萬只感染禽白血病的商品雞。正是由于它會對養(yǎng)雞業(yè)造成重大危害,所以禽白血病的凈化已經(jīng)達成行業(yè)共識。

禽白血病的凈化難點

實現(xiàn)全國性的禽白血病凈化是非常困難的。原因也很多,國內(nèi)家禽養(yǎng)殖模式復雜,有散戶,規(guī)?;B(yǎng)殖場,而且雞的品種較多,共同進行監(jiān)測凈化,難度可想而知。并且國內(nèi)白羽肉雞種源并沒有完全實現(xiàn)自給自足,依然有進口的需求,而進口的種源也未必是完全干凈。從保護易感動物角度來看,藥物治療和疫苗免疫并不可行,我們只能通過以檢測淘汰的方式來實現(xiàn)禽白區(qū)域或者場內(nèi)凈化。但是檢測凈化同樣面臨很多的問題。其中最為關(guān)注的有3點,一個是內(nèi)源性禽白血病毒的干擾問題嚴重。第二個就是診斷試劑的質(zhì)量參差不齊,主要體現(xiàn)在試劑的敏感度低和穩(wěn)定性差這兩個方面。第三個就是針對k亞群檢出率不高的問題特別突出,K亞群的復制能力相較于其他亞群來說較慢,國內(nèi)外很多文獻對這一點也有大量的研究。據(jù)推測,極大可能是因為它的LTR區(qū)域源自ALV-E。這個LTR區(qū)域可能是某些商業(yè)ELISA試劑盒對ALV-K亞群檢出率低的主要原因。還有就是這么多亞群的禽白病毒,變異重組的現(xiàn)象時有發(fā)生,這也會加大了禽白血病凈化的難度。


當前禽白血病病原主要檢測技術(shù)

禽白血病毒的檢測凈化過程中需要檢測兩個抗原。一個是群特異抗原,就是p27抗原,這個抗原非常保守,各亞型之間的p27同源性非常高。另外一個是亞群特異性抗原,也就是gp85,每種亞型的gp85同源性不高,所以可以做亞型的鑒定。

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?在做群特異性鑒定中常用到的是病毒分離方法,這個也是國際公認的特異性最強的一種檢測方法,但是它對人員操作要求非常高,不同的人在同一時間地點做,都會有很大的區(qū)別,而且檢測時間長,成本高,所以我們只在ELISA抗原初篩為陽性之后再做分離培養(yǎng)。

?ELISA方法是禽白凈化常用的核心檢測方法,優(yōu)點比較多,如操作簡單、可以大批量檢測、敏感度高,特異性強,樣本適應性較廣,但缺點是不能區(qū)分內(nèi)外源。

?膠體金的方法雖然操作簡單,但是它的敏感性不高,跟ELISA方法相差較大,容易出現(xiàn)漏檢的情況。

?PCR方法在其他動物疫病檢測中已經(jīng)大范圍使用,具有顯著的優(yōu)點。但是在禽白檢測過程中,并沒有大面積推廣使用。究其原因,主要是因為病毒變異,引物不能完全覆蓋目標基因;還有就是宿主體內(nèi)存在大量的內(nèi)源ev位點,容易出現(xiàn)假陽性的情況。

?還有一種亞群特異性檢測方法是IFA技術(shù),它是利用ALV的表面抗原和特異性的抗體結(jié)合的一種方法。

通過比較上述幾種禽白血病的檢測方法的優(yōu)劣勢我們就可以了解了為什么當前的檢測技術(shù)依然是以p27抗原ELISA技術(shù)和病毒分離培養(yǎng)為主要的檢測手段了。


試劑盒性能現(xiàn)狀

當前p27抗原ELISA試劑盒的產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊,對于試劑盒的敏感性和穩(wěn)定性我們尤其關(guān)注。我們對這兩個方面也做了一些研究比對工作,并得出了一系列結(jié)論。

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實驗1結(jié)論:明日達兩款試劑盒對p27蛋白的最低檢測限可以達到0.61ng/ml,一家進口、兩家國產(chǎn)的試劑盒可以達到1.22ng/ml,還有一款國產(chǎn)產(chǎn)品為4.88ng/ml。整體來看,大部分國產(chǎn)的試劑盒對p27抗原的檢測分析靈敏度表現(xiàn)良好。

實驗2、3結(jié)論:明日達的試劑盒在對ALV-A/B/J/K四種亞型的細胞感染檢測中都表現(xiàn)出較好的分析敏感性,相較于其他廠家來說,在低劑量的情況下檢出時間早1-2天,而這個特點有助于禽白血病的早期診斷。

p27蛋白和ALV-A/B/J/K早期感染檢測分析敏感性高的試劑盒產(chǎn)品,不代表在診斷敏感性上也具有優(yōu)勢,應該綜合評判試劑盒的性能。明日達試劑盒早期分析靈敏度和診斷靈敏度這兩個方面表現(xiàn)都非常優(yōu)秀。

實驗4結(jié)論:檢測了三家進口和兩家國產(chǎn)的試劑盒發(fā)現(xiàn),進口試劑盒的重復性不一定比國產(chǎn)的好,有兩家進口的試劑盒的cv%值在10%-15%,只有一家進口產(chǎn)品可以穩(wěn)定在5%以內(nèi),而明日達的試劑盒在這方面可以做到<3%。

(實驗數(shù)據(jù)為明日達自測數(shù)據(jù),僅供參考。歡迎大家試用比對)

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